Coronavirus Ùr-nodha (SARS-CoV-2) Pasgan PCR ioma-ùine fìor-ùine
Tha an uidheamachd PCR làn-mhothachail, deiseil seo ri fhaighinn ann an cruth lyophilized (pròiseas reothadh-tiormachadh) airson stòradh fad-ùine.Faodar am pasgan a ghiùlan agus a stòradh aig teòthachd an t-seòmair agus tha e seasmhach airson aon bhliadhna.Anns gach tiùb de premix tha na h-ath-bheachdan uile a dh ’fheumar airson leudachadh PCR, a’ toirt a-steach Reverse-transcriptase, Taq polymerase, primers, probes, agus substrates dNTPs.Chan fheum e ach uisge grùide 13ul agus teamplaid RNA air a thoirt a-mach 5ul a chuir ris, an uairsin faodar a ruith agus àrdachadh air na h-ionnstramaidean PCR.
Bu chòir don inneal qPCR na riatanasan a leanas a choileanadh:
1. Fit 8 stiall PCR tube leabhar 0,2 ml
2. Barrachd air ceithir seanailean lorgaidh a bhith agad:
| Seanail | Excitation (nm) | Sgaoileadh (nm) | Dathan Ro-Calibrated |
| 1. | 470 | 525 | FAM, SYBR Uaine I |
| 2 | 523 | 564 | VIC, HEX, TET, JOE |
| 3. | 571 | 621 | ROX, TEXAS-RED |
| 4 | 630 | 670 | CY5 |
Àrd-ùrlaran PCR:
Siostam PCR fìor-ùine 7500, Biorad CF96, iCycler iQ ™ Siostam lorgaidh fìor-ùine PCR, Stratagene Mx3000P, Mx3005P
An duilgheadas a th ’ann a bhith a’ giùlan slabhraidh fuar de dh’ inneal lorg searbhag niuclasach Novel Coronavirus
Nuair a thèid ath-bheachdan lorg searbhag niuclasach gnàthach a ghiùlan air astar fada, tha feum air stòradh agus còmhdhail slabhraidh fuar (-20±5) ℃ gus dèanamh cinnteach gum fuirich bith-ghnìomhach enzyme anns na h-ath-bheachdan gnìomhach.Gus dèanamh cinnteach gu bheil an teòthachd a’ ruighinn na h-ìre àbhaisteach, tha feum air grunn chileagraman de deigh thioram airson gach bogsa de dh’ inneal deuchainn searbhag niuclasach eadhon nas lugha na 50 g, ach chan urrainn dha mairsinn ach airson dhà no trì latha.A thaobh cleachdadh gnìomhachais, tha fìor chuideam ath-bheachdan a chuir luchd-saothrachaidh a-mach nas lugha na 10% (no fada nas lugha na an luach seo) den inneal-giùlain.Tha a’ mhòr-chuid den chuideam a’ tighinn bho deigh thioram, pacaidean deigh agus bogsaichean foam, agus mar sin tha a’ chosgais còmhdhail gu math àrd.
Anns a’ Mhàrt 2020, thòisich COVID-19 a’ briseadh a-mach gu ìre mhòr thall thairis, agus mheudaich an t-iarrtas airson ath-ionaid lorg searbhag niuclasach Novel Coronavirus gu mòr.A dh ’aindeoin cosgais àrd às-mhalairt na h-ath-bheachdan anns an t-sreath fhuar, faodaidh a’ mhòr-chuid de luchd-saothrachaidh fhathast gabhail ris air sgàth meud mòr agus prothaid àrd.
Ach, le leasachadh air poileasaidhean às-mhalairt nàiseanta airson toraidhean an-aghaidh galar lèir-sgaoilte, a bharrachd air ùrachadh smachd nàiseanta air sruthadh dhaoine agus logistics, tha leudachadh agus mì-chinnt ann an ùine còmhdhail ath-bheachdan, a dh’ adhbhraich duilgheadasan toraidh follaiseach. le còmhdhail.Bidh ùine còmhdhail leudaichte (ùine còmhdhail timcheall air leth-mhìos gu math cumanta) a ’leantainn gu fàilligeadh toraidh tric nuair a ruigeas an toradh an neach-dèiligidh.Tha seo air dragh a chuir air a’ mhòr-chuid de dh’ iomairtean às-mhalairt ath-bheachdan searbhag niuclasach.
Chuidich teicneòlas Lyophilized airson imoibrí PCR le bhith a’ giùlan inneal lorg searbhag niuclasach Novel Coronavirus air feadh an t-saoghail
Faodar na h-ath-bheachdan PCR lyophilized a ghiùlan agus a stòradh aig teòthachd an t-seòmair, a dh’ fhaodadh chan e a-mhàin cosgais còmhdhail a lughdachadh, ach cuideachd na duilgheadasan càileachd a dh ’adhbhraicheas pròiseas còmhdhail a sheachnadh.Mar sin, is e lyophilizing an reagent an dòigh as fheàrr air fuasgladh fhaighinn air duilgheadas còmhdhail às-mhalairt.
Tha lyophilization a’ toirt a-steach fuasgladh a reothadh gu staid chruaidh, agus an uairsin sublimate agus dealachadh an bhalbha uisge fo staid falamh.Tha an t-solute tioram a 'fuireach anns a' ghobhar leis an aon chumadh agus gnìomhachd.An coimeas ri ath-bheachdan liùlach àbhaisteach, tha na feartan a leanas aig an inneal lorg searbhag niuclasach lyophilized Novel Coronavirus a rinn Liming Bio:
Seasmhachd teas air leth làidir:faodaidh e le làimhseachadh seasamh aig 56 ℃ airson 60 latha, agus morphology agus coileanadh an reagent fhathast gun atharrachadh.
Stòradh agus còmhdhail teòthachd àbhaisteach:chan eil feum air slabhraidh fuar, chan eil feum air stòradh aig teòthachd ìosal mus tèid a chuir a-mach, leig às an àite stòraidh fuar gu tur.
Deiseil airson a chleachdadh:lyophilizing a h-uile co-phàirtean, chan eil feum air rèiteachadh an t-siostam, a 'seachnadh call co-phàirtean le àrd slaodachd leithid enzyme.
Targaidean ioma-fhillte ann an aon phìob:tha an targaid lorgaidh a’ còmhdach gine coronavirus ùr ORF1ab, gine N, gine S gus genovaration bhìoras a sheachnadh.Gus àicheil meallta a lughdachadh, thathas a’ cleachdadh gine RNase P daonna mar smachd a-staigh, gus coinneachadh ris an fheum clionaigeach airson smachd càileachd sampall.
